近来北京市某些医院院内感染性腹泻与Noro病毒相关

2006年11月上中旬,北京市某些综合医院内老年病科和心脏外科术后的一些住院患者先后发生腹泻、呕吐,因患者症状相似,疑为院内感染;细菌学检测的结果基本可以排除细菌感染,希望进一步做病毒病原学检测。笔者根据这些医院反映的有关情况制定了检测方案。当时考虑到三种可能:①时值轮状病毒的流行季节,目前儿科腹泻住院患儿的轮状病毒检测阳性率达70%～80%,而上述医院发生的腹泻病例均为老年人和心脏术后机体抵抗力     

北京地区人群中人偏肺病毒血清抗体水平的初步调查

目的通过对人类偏肺病毒（hMPV）特异性IgG抗体检测,初步了解北京地区人群中该病毒感染的状况。方法以大肠杆菌表达的hMPV核蛋白（N蛋白）为抗原,用Western-blot检测随机选取的116例血清标本中hMPVN蛋白特异性IgG抗体,以确定表达的hMPVN蛋白的抗原特异性。随后对1996年4月至1997年3月自首都儿科研究所附属儿童医院和北京宣武医院采集的门诊非呼吸道感染患者及正常儿童的体检血清710例进行hMPVN蛋白特异性IgG抗体检测。结果hMPVN蛋白的抗原特异性试验证明表达的hMPV的N蛋白特异性好。本组710份血清中,抗hMPVN蛋白IgG抗体总阳性率为17．2％（122／710）。其中〈1个月的婴儿抗体阳性率为13．2％,1个月～的婴儿中抗体阳性率下降至6．1％,2个月～的婴儿中抗体阳性率降至最低（3．1％）,6个月～的婴儿中抗体阳性率上升至13．9％,在随后的几个年龄段内抗体阳性率维持在13．0％左右,30岁以后的人群中抗体阳性率有所升高,30岁～人群中达28．1％,40岁～人群中达32．3％,≥50岁的人群中达38．5％。结论研究中所应用的hMPVN蛋白的抗原特异性好;抗体的检测结果提示在北京地区的人群中hMPV的感染并不少见,血清抗体阳性率低的年龄组与文献报道感染发生率高的年龄组相符。     

北京地区2007-2008年G9型A组人轮状病毒VP7和VP4基因分析

目的 了解北京地区2007-2008年检测到的G9型A组人轮状病毒外壳蛋白VP7和VP4的基因特征.方法 选取经过轮状病毒核酸杂交方法检测为G9型轮状病毒的12份儿童腹泻患儿的粪便标本,应用针对VP7全长基因的特异引物对进行RT-PCR扩增,对所获得的VP7全长基因进行克隆和测序,将所获得的序列与GenBank中的G9型原型病毒株和近期流行株的VP7基因进行序列和种系进化分析;经巢式PCR对G9型的VP4进行P基因分型.结果 12株G9型轮状病毒经VP7基因的序列比较分析得到确认.P基因分型结果显示北京地区近年来存在G9P[8]和G9P[6]型两种组合的轮状病毒感染.序列和种系进化分析发现北京G9型株VP7基因与世界范围内近期流行的G9型株一样都属于进化分支Ⅲ,彼此间的核苷酸和氨基酸同源性较高,而与国内最早报道的G9型T203进化关系较远,且北京G9P[8]和G9P[6]型株分别与国内近期报道的新疆G9P[8]和G9P[6]型株及相应的武汉G9型株VP7基因,在氨基酸位点上存在一些共同的氨基酸残基取代.结论 北京地区近年存在G9P[8]和G9P[6]两种不同基因组合的G9型轮状病毒感染,需要进一步加强对G9型轮状病毒的分子流行病学监测.     

改进探针标记法斑点杂交在轮状病毒VP7分型中的应用

目的建立一种更加简便的A组人轮状病毒（HRV）核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRV VP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR分别将地高辛标记HRV 5种常见型别（G1～4,G9型）的DNA探针,建立基于VP7的斑点杂交方法;选取经抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测均为HRV阳性的2006至2008年住院腹泻患儿粪便标本200份,RT-PCR扩增VP7全基因,并对扩增阳性产物应用斑点杂交方法进行G型别分析。结果建立的斑点杂交方法在5种型别探针间无交叉反应,各型探针的检测灵敏度可达到10 pg。200份PAGE阳性标本中162份RT-RCR扩增VP7基因阳性,斑点杂交显示G1型41例(25.3%),G2型2例(1.2%),G3型63例(38.9 %),G9型35例(21.6%),混合感染19例（11.7%）,杂交未分出型2例(1.2%),未检测到G4型HRV。结论本研究所建立的斑点杂交方法敏感度和特异度强,适合在HRV大规模分子流行病学调查时应用。通过该方法的初步应用,发现北京地区婴幼儿HRV除了常见的G1、G2和G3型外,还有G9型感染。     

新型人冠状病毒NL63膜蛋白(M)基因的序列分析及其抗原表位预测分析

目的了解新发现的、与北京地区婴幼儿急性呼吸道感染相关的人冠状病毒HCoV-NL63的主要结构蛋白——膜蛋白（M）的基因特征。方法分别从2份已确认为HCoV-NL63阳性的、取自急性呼吸道感染患儿的标本（BJ3140和BJ8081）中用RT-PCR方法扩增得到其M蛋白的全基因，在对其进行了序列分析的基础上对推导出的M蛋白的抗原表位进行了预测分析。结果BJ3140和BJ8081的M蛋白编码基因全长681bp，编码一个含226个氨基酸的蛋白。BJ3140和BJS081之间M基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为99．1％和99．6％；与HCoV-NL63原型株有很高的核苷酸（99．1％～99．7％）和氨基酸同源性（99．6％和98．7％），而与HCoV-229E的氨基酸同源性为61．3％，与HCoV-OCA3和SARS-CoV氨基酸同源性则低于31．0％。BJ3140和BJS081的M蛋白N端21个氨基酸位于病毒包膜外区，随后是3次跨膜区，最后是较长的包膜内区。不同方法的预测结果显示BJ3140的M蛋白的B细胞表位优势肽段多位于C-末端包膜内区域。结论从北京地区婴幼儿HCoV-NL63感染阳性的呼吸道标本中扩增得到的M蛋白编码基因与HCoV-NL63原型株有很高的同源性，具有与其他冠状病毒M蛋白相似的结构特征。     

冬春季节儿童急性上呼吸道感染病毒病原学监测及临床研究

目的　了解急性上呼吸道感染 (AURI)儿童致病的病原及其临床表现。方法　 2 0 0 0年 11月至 2 0 0 3年 3月分别在冬春季节对首都儿科研究所附属儿童医院门诊 1个月至 12岁 ,发病在 3d内的AURI患儿进行咽拭子标本病毒分离、特异性血清抗体及间接免疫荧光监测 ,检测流感病毒甲1、甲3 、乙型 (A1、A3 、B型 ) ,呼吸道合胞病毒 (RSV)、腺型病毒 (ADV)及副流感病毒 1,3型 (PIF1、PIF3 )等共 7种病毒 ,并记录临床症状和体征。结果　流感病毒为AURI第 1位病毒感染病原 ,其他依次为RSV、ADV及PIF1、PIF3 。A1、A3 、B型流感病毒在冬春季节可同时出现流行 ,A1、A3 型流感病毒多发病于流行早、中期 ,B型流感病毒多发病于流行中后期。 2 0 0 0年 11月至2 0 0 1年 3月曾暴发 1次B型流感病毒局部流行。RSV、ADV在冬春季节同样处于活动状态。结论　流感病毒是冬春季节儿童AURI的主要病毒感染病原 ,同时RSV及ADV亦处于活动状态。     

北京市某些医院内腹泻暴发与诺如病毒的相关性研究

目的确定2006年11-12月北京市某些医院内发生的住院患者腹泻爆发性流行的病原及其分子生物学特点。方法首先检测腹泻标本中轮状病毒抗原并用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行轮状病毒核酸检测,然后用逆转录-聚合酶链反应进行诺如病毒核酸检测,对检测阳性标本进行诺如病毒VP1全基因的扩增;并对其中一例进行全基因克隆、测序和分析。另外对来自不同医院的2份阳性标本中的VP1的5′端部分序列进行测序分析。结果30份腹泻患者粪便标本中共有17份检测为诺如病毒阳性,总阳性率为56.7%,每一家医院送检标本的阳性率都在42.9%以上。对其中一份标本的诺如病毒VP1全基因序列测定和分析显示为GⅡ-4型诺如病毒。另2份标本中的部分序列测定显示与全基因序列高度保守,只有1个核苷酸的差异,因此也提示为GⅡ-4型诺如病毒。结论诺如病毒是北京地区医院内腹泻暴发的重要病原,此次暴发极可能是由GⅡ-4型诺如病毒引起。     

北京地区婴幼儿急性呼吸道感染与新近报道的人细小病毒相关性的初步研究

目的了解北京地区婴幼儿急性呼吸道感染与新近报道的人细小病毒（human bocavirus,HBoV）的关系.方法选择2003年11月至2004年2月收集的经间接免疫荧光和/或病毒分离排除了常见呼吸道病毒感染的急性呼吸道感染患儿标本319例,应用针对HBoV的NP1基因的PCR引物进行HBoV基因片段检测,随机选取HBoV基因检测阳性标本中的5例,对其PCR扩增产物直接进行核苷酸序列测定.将所测到的序列与GenBank中的基因序列进行比较分析.结果319例标本中HBoV基因检测阳性的为13例,其阳性检出率占本组检测标本的4.1%;HBoV阳性检出率在本组的毛细支气管炎患儿中最高,达10.9%（5/46）,其次为支气管炎患儿（6.3%,2/32）;HBoV检测阳性标本的患儿年龄主要分布于5个月～5岁,尤其是＜1岁的患儿;其中6～7个月的患儿中HBoV检测阳性的占50%（2/4）,9～10个月的患儿中阳性的占25%（2/8）,其次为5～6个月的患儿（18.2%）、11个月～1岁的患儿（14.3%）及8～9个月的患儿（12.5%）;在＜5个月的总计103例患儿中以及＞5岁的28例患儿中均未检测到HBoV阳性标本;基因序列分析表明,本研究中5例北京的HBoV之间基因序列的同源性在99.7%～100%之间;与st1、st2株的同源性为99.2%～99.4%.结论本研究结果提示北京地区部分儿科患者的急性呼吸道感染与HBoV有关,且HBoV感染在低年龄组儿童中更为常见.     

病毒性疾病防治需要规范病原学诊断

人们对病毒性疾病的危害已有共识,不断发展的新技术使得病毒病原的检测和确定变得更加敏感、特异且快速.病毒病原的诊断和确定由于临床医学和药物研究的发展和需求显得越来越重要,如何选择诊断方法,是正确诊断病原的关键.在当前病毒性疾病防治工作中,亟须规范、高质量、有批准文号、可用于临床实验室的病原学诊断试剂盒的面世.     

近年北京儿科急性呼吸道感染患儿中腺病毒的型别监测

目的 了解近年北京地区儿科急性呼吸道感染患儿中人腺病毒(ADV)感染状况及ADV的型别.方法 2003年至2008年,连续6年通过病毒分离和(或)间接免疫荧光法,对收集的首都儿科研究所就诊的急性呼吸道感染患儿的17 941份标本进行ADV检测,对其中285份毒株或阳性标本提取DNA,通过3、7、11和21型4对分型引物的多重聚合酶链反应,确定3、7、11和21型ADV,对少数扩增阴性的标本或毒株,再使用2对可扩增所有ADV的通用引物对其DNA进行扩增,将PCR产物直接测序,结果与GenBank上的序列比较,确定其型别.结果 在17 941份呼吸道标本中,经病毒分离和(或)间接免疫荧光法确定为ADV阳性的标本304份,总阳性率为1.69%.对其中285份毒株或阳性标本的PCR分型结果:272例用3、7、11、21型分型引物扩增确定了型别:3型ADV 174例,占61.1%(174/285),7型ADV 92例,占32.3%,11型ADV 6例,占2.1%;有13例经分型引物扩增为阴性,经过通用引物扩增后的PCR产物测序确定为2型ADV 9例,占3.2%(9/285);6型ADV2例,占0.7%,1型和5型ADV各1例,各占0.4%.结论 本组ADV阳性检出率为1.69%.近年来北京地区ADV感染以3、7型为主,其次为2型和11型,1、5和6型较为少见,尚未发现其他型别.